现代分子生物学技术

Tris·cl 三羟甲基氨基甲烷(用于凝胶电泳配置缓冲液)
Tris·cl 和 Tris-HCL 是一个东西
EDTA 乙二胺四乙酸 (结合重金属,抑制酶)
SDS 生化分析电泳离子对冲剂
CH3COOK 醋酸钾
氨苄青霉素 Amp
Spin column 核酸纯化柱
质粒电泳一般有三条带,分别为质粒的超螺旋,线型,开环三种构型
通常抽到的质量好的质粒只有或大部分是超螺旋,只有少量开环或线性,没有染色体DNA的污染
蛋白质吸光值最高峰280nm
核酸吸光值最高峰260nm
质粒吸光值260nm/280nm比值结余1.7~1.9之间,说明质粒质量较好
每种真核生物的单倍体基因组中的全部DNA量成为C值
细菌结构基因中没有内含子,也无重叠现象,具有操纵子结构
除逆病毒外,所有细菌基因都是单拷贝的
分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如减少酚/氯仿抽提,混匀过程要轻缓,保证得到较长的DNA
PVP 聚乙烯吡咯烷酮 既溶于水,又溶于大部分有机溶剂、毒性很低、生理相溶性好
巯基乙醇 βME 通常用于防止二硫键的氧化,可以作为生物学实验中的抗氧化剂
TE 缓冲液 Tris-EDTA的缩写,一般包括TAE、TBE和TPE,纯化DNA时用
纯的 DNA 情况下:OD260/OD280 的值为 1.8
CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,但不会沉淀核酸。再通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后,加入乙醇沉淀,即可使核酸分离出来。
agarose 胶 琼脂糖胶
dd H2O 双蒸馏水
RNA 提取关键:①样品细胞或组织的有效破碎;②有效地使核蛋白复合体变性;③对内源 RNA 酶的有效抑制;④有效地将 RNA 从 DNA 和蛋白质的混合物中分离;⑤对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去
目前普遍使用 的RNA 提取法有两种:基于异硫氰酸胍/苯酚混合试剂的液相提取法(即 Trizol 类试剂)和基于硅胶膜特异性吸附的离心柱提取法
DEPC 焦碳酸二乙酯 强烈但不彻底的RNA酶抑制剂
DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。
Taq酶 热聚合酶
SYBR GREEN I 也可以和这些非特异性扩增产物结合,发出荧光,从而干扰对特异性产物的准确定量

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