import xlrd
import xlwt

# 打开A表，将A表的数据存放到cols1中，这里打印出来是方便查看测试数据。
data1 = xlrd.open_workbook(r'F:\cars\车牌A.xlsx')
sheet1 = data1.sheets()[0]
# 行
#rows = sheet.row_values(0)
# 列（我这里表中只有一列数，查出整列的数据放到列表中）
cols1 = sheet1.col_values(0)
print(cols1)

# 打开B表，将B表的数据存放到列表cols2中，这里打印出来是方便查看测试数据。
data2 = xlrd.open_workbook(r'F:\cars\车牌B.xlsx')
sheet2 = data2.sheets()[0]
cols2 = sheet2.col_values(0)
print(cols2)

data3 = xlwt.Workbook()
sheet3 = data3.add_sheet(u'sheet3')
# 存放A表在B表没有的数据
str_temp = []

# 取出A表在B表没有的数据放到str_temp
for i in range(0, len(cols1)):
    if cols1[i] not in cols2:
        str_temp.append(cols1[i])

# 将str_temp得到的数据，存到新的Excel
for j in range(len(str_temp)):
        sheet3.write(j, 0, str_temp[j])
# 保存到该路径
data3.save(r'F:\cars\车牌D.xls')
print(str_temp)

A表中数据如图：

B表数据如图：

注意：D表不是新建好的，是执行代码之后自动创建的，执行代码后打开D表如图：