吖啶酯标记蛋白效率计算方法

1. 取100uL 待测样品，稀释至Abs280在0.1~1.5之间；

2. 向1中加入少量盐酸，调整至pH=1~2，使其形成具有黄色特征的盐溶液，吸收峰在367nm

3. 分别测试待测样品的Abs280nm 和Abs367nm ；

4. Equation1: 吖啶酯浓度(mol/L)=Abs367/14650 ；

5. 校正蛋白Abs280数值

Equation2: Abs280(校正后) = Abs280- (Abs367×0.17);

6. 准备1mg/ml 未标记的蛋白溶液（e.g. 50ug 蛋白加入50µL 标记缓冲液），取出10µL 并补加490µL ddH2O (稀释50倍)。读取Abs280nm ，并乘以稀释倍数。

7. 计算蛋白质量浓度（mg/ml）

 Equation3:蛋白摩尔浓度 （mol/L）

8. 计算F/P摩尔比

相关图示分析：

使用较高浓度（10mg/ml）吖啶酯DMSO溶液20uL，直接加入100uL吖啶酯发光液，可以发射出肉眼可见的蓝光（430nm）。但是该信号衰减很快，整个发光时间仅有几秒钟，因此需要使用具有闪光型化学发光采集功能的仪器进行信号采集。

蛋白标记效果测试。以吖啶酯标记BSA为例，配制2.5mg/ml 吖啶酯 DMSO母液，溶有15mg/ml BSA 的0.2M碳酸氢钠溶液(pH9.0)。为了充分标记BSA，避免染料残留对效果验证的影响，本次实验使用的染料摩尔数低于常规用量，按照染料母液：蛋白溶液=1：100 体积比，总体积1ML。室温标记1h后，过G25脱盐柱，纯化缓冲液为磷酸一氢钠/磷酸二氢钠 （1:1） 0.1M 混合体系，PH=6.7(盐酸微调)。

以下是相关发光底物列表：
吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH    
吖啶酯-T4结合物    
吖啶酯-T3结合物    
吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺    
吖啶磺酰胺盐-T4结合物    
吖啶磺酰胺盐-T3结合物    
生物素-T4结合物    
化学发光分析试剂及标记物    
生物素-T3结合物    
生物素-NHS活性酯    35013-72-0
吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH    
吖啶酯NSP-DMOAE-NHS    
吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHS    
Cy3-NHS酯    146368-16-3
Cy7-NHS酯    
5-羧基荧光素-NHS酯    92557-80-7
6-羧基荧光素-NHS酯    92557-81-8
5(6)-羧基荧光素-NHS酯    117548-22-8
6-羧基荧光素    3301-79-9
酚磺酞DIDNTB    
固紫B盐
甘氨胆酸钠
甘氨酰-脯氨酰-对硝基苯胺对甲苯磺酸盐
Z-甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺
鲁米诺钠盐    20666-12-0
2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐    30931-67-0
2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷 (CNP-AFU )    157843-41-9
2-氯-4-硝基苯-α-D麦芽三 糖苷    118291-90-0
β-磷酸甘油酯二钠盐五水合物    13408-09-8
L-亮氨酸-4-硝基苯胺盐酸盐    16010-98-3
牛血清白蛋白(BSA)    9048-46-8
N-(1-萘基)-3-氨基丙磺酸钠盐    104484-71-1
D-葡萄糖-6-磷酸二钠    3671-99-6
D-葡萄糖-6-磷酸钠盐    54010-71-8
3-羟基-1,2,3,4-四氢苯并[h]喹啉    5423-67-6
2-羟基-3，5-二氯苯磺酸钠盐(DHBS)    54970-72-8
鲁米诺/3-氨基苯二甲酰肼/发光氨    521-31-3
异鲁米诺/4-氨基邻苯二甲酰肼    3682-14-2
吖啶酯DMAE-NHS    115853-74-2
吖啶酰肼NSP-SA-ADH    
吖啶酯ME-DMAE-NHS    
TOOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐    
MAOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲基苯胺钠盐    
ADOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基l)-3-甲氧基苯胺钠盐    
TOPS /N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐    
ADPS/N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐    
ALPS/N-乙基-N-(3-磺丙基)苯胺钠盐    
DAOS/N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐    
HDAOS/N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠盐    
MADB/N,N-二(4-磺丁基)-3,5-二甲基苯胺钠盐    
三（羟甲基）氨基甲烷盐酸盐Tris-HCL    1185-53-1
三（羟甲基）氨基甲烷Tris    77-86-1
N,N-二羟乙基甘氨酸BICINE    150-25-4
3-(环己胺)-1-丙磺酸CAPS    1135-40-6
3-吗啉丙磺酸MOPS    1132-61-2
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸TAPS    29915-38-6
N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-3-丙磺酸 EPPS    16052-06-5
3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸MOPSO    68399-77-9
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES    7365-45-9
哌嗪-N,N'-二(2-乙磺酸)PIPES    5625-37-6
磷酸烯醇丙酮酸三(环已胺)盐PEP    35556-70-8
病毒保存液    
肝素锂    9045-22-1
吖啶酯己二酰阱NSP-DMAE-ADH    
吖啶酯-T4结合物    
吖啶酯-T3结合物    
吖啶磺酰胺盐-N-乙胺基马来酰亚胺    
吖啶磺酰胺盐-T4结合物    
吖啶磺酰胺盐-T3结合物    
生物素-T4结合物    
化学发光分析试剂及标记物    
生物素-T3结合物    
生物素-NHS活性酯    35013-72-0
吖啶磺酰胺NSP-SA-ADH    
吖啶酯NSP-DMOAE-NHS    
吖啶酯NSP-DMOAE-PEG-GT-NHS    
Cy3-NHS酯    146368-16-3
Cy7-NHS酯    
5-羧基荧光素-NHS酯    92557-80-7
6-羧基荧光素-NHS酯    92557-81-8
5(6)-羧基荧光素-NHS酯    117548-22-8
6-羧基荧光素    3301-79-9
酚磺酞DIDNTB    
丹磺酰氯    605-65-2
异鲁米诺ABEI-DSC    
 

 

 

以上内容来自齐岳小编zzj 2021.5.14